CAPÍTULO 1 · PLATAFORMA TRIDIMENSIONALHacer visible y cuantificable el órgano íntegro.
El método CUBIC puede adaptarse al páncreas murino adulto para obtener preparaciones transparentes compatibles con el análisis tridimensional, preservando la arquitectura, la fluorescencia endógena y la inmunocompatibilidad.
Su integración con LSFM y segmentación computacional permitiría visualizar y cuantificar poblaciones pancreáticas dentro del órgano completo.
Objetivo general
Desarrollar y evaluar una plataforma integral de aclaramiento, inmunofluorescencia, adquisición volumétrica y cuantificación tridimensional del páncreas murino.
Objetivos específicos del capítulo 1
- Optimizar el protocolo CUBIC para el páncreas murino adulto.
- Desarrollar y evaluar la perfusión intravascular de los reactivos.
- Evaluar la compatibilidad con inmunofluorescencia en profundidad.
- Comprobar la preservación de fluoróforos endógenos en modelos transgénicos.
- Integrar el aclaramiento con la adquisición de volúmenes completos mediante LSFM.
- Establecer la reconstrucción, segmentación y extracción de variables morfométricas mediante Imaris.
Explorar la formación de nuevas células β.
La activación sistémica de la señalización BMP mediante THR-123 podría inducir la expansión y diferenciación de progenitores ductales en ratones con diabetes inducida químicamente y generar nuevas células β funcionales.
Objetivo general
Evaluar la regeneración pancreática en respuesta a THR-123 y caracterizar el mecanismo de formación de nuevas células β.
Objetivos específicos del capítulo 2
- Identificar células Alk3+/P2RY1+ respondedoras a BMP-7.
- Verificar la llegada de THR-123 al páncreas tras su administración sistémica.
- Determinar su efecto sobre la glucemia en modelos diabéticos y no diabéticos.
- Examinar explicaciones alternativas a la neogénesis: inflamación, sensibilidad a la insulina y citoprotección.
- Caracterizar la composición celular y observar la aparición de nuevas células β.
- Analizar la dinámica transcriptómica y las poblaciones implicadas en la transición endocrina.
- Evaluar la arquitectura, la distribución y la morfometría endocrina mediante CUBIC–LSFM y análisis 3D.
